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Title: Purificação de histonas humanas recombinantes para montagem do dímero de histonas H2A : H2B e ação de extrato lipídico fecal de camundongos, na fisiologia celular
Authors: Montenegro, Natália de Aguiar
metadata.dc.contributor.email: natalia.montenegro94@gmail.com
Orientador(es):: Santos, Guilherme Martins
Assunto:: Histonas recombinantes
Proteínas recombinantes
Nucleossomo
Lipídios
Extrato fecal
Issue Date: 28-Jan-2024
Citation: MONTENEGRO, Natália de Aguiar. Purificação de histonas humanas recombinantes para montagem do dímero de histonas H2A: H2B e ação de extrato lipídico fecal de camundongos, na fisiologia celular. 2019. 59 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, 2019.
Abstract: A cromatina é formada por unidades repetitivas de nucleossomo, que é composto pelo octâmero de histonas associado ao DNA. Na primeira parte desse trabalho apresento a purificação de histonas recombinantes humanas para montagem do dímeros de histonas H2A:H2B, com o objetivo de realizar estudos estruturais da cromatina. As histonas H2A, H2B, H3 e H4 foram expressas por cepa Rosetta PlysS e purificadas por cromatografia de troca iônica. As histonas purificadas individualmente H2A, H2B, H3 e H4 foram bem expressas. A purificação das histonas H2A, H2B e H3 foram bem-sucedidas, apresentaram um grau de pureza suficiente para a montagem do dímero H2A:H2B por cromatografia de exclusão de tamanho. Contudo, a purificação da histona H4 apresentou diversos contaminantes, impossibilitando a montagem do octâmero. Na segunda parte do trabalho, baseado na hipótese de que lipídeos oriundos da microbiota possam ser usados para regular a função celular, realizei a extração lipídica de material fecal de camundongos. A extração de lipídios de material fecal e ração utilizada na dieta de camundongos foi realizada sob dietas hiperlipídicas ou normolipídicas utilizando o método metanol-clorofórmio. Os extratos foram padronizados por espectrofotometria de absorbância UV. Para se observar o efeito dos extratos sobre a viabilidade de três linhagens celulares humanas, de origem tumoral (HepG2 e HeLa) e não tumoral (MSC). Observamos que o extrato normolipídico fecal possui um maior efeito inibitório na viabilidade celular que o extrato hiperlipídico fecal. Além disto, observamos que o extrato lipídico proveniente da dieta apresenta resultados diferentes quando comparado ao proveniente de material fecal. Estes resultados sugerem que metabolitos lipídicos possuem efeitos na viabilidade celular.
Abstract: Chromatin is formed by repeating nucleosome units, which is composed of the histone octamer associated with DNA. In the first part of this work I present the purification of human recombinant histones for the assembly of histone dimers H2A: H2B, in order to perform structural chromatin studies. Histones H2A, H2B, H3 and H4 were expressed by Rosetta PlysS strain and purified by ion exchange chromatography. Individually purified histones H2A, H2B, H3 and H4 were well expressed. Purification of the histones H2A, H2B and H3 were successful, showed a sufficient degree of purity for the assembly of the dimer H2A: H2B by size exclusion chromatography. However, the purification of histone H4 presented several contaminants, making it impossible to mount the octamer. In the second part of the work, based on the hypothesis that lipids from the microbiota can be used to regulate cell function, I performed the lipid extraction of fecal material from mice. The lipid extraction of fecal material and ration used in the diet of mice was performed under hyperlipid or normolipid diets using the methanol-chloroform method. The extracts were standardized by UV absorbance spectrophotometry. In order to observe the effect of the extracts on the viability of three human cell lines, of tumor origin (HepG2 and HeLa) and non-tumoral (MSC) origin. We observed that the fecal normolipid extract has a greater inhibitory effect on cell viability than the fecal hyperlipid extract. In addition, we observed that the lipid extract from the diet presents different results when compared to that from fecal material. These results suggest that lipid metabolites have effects on cell viability.
metadata.dc.description.unidade: Faculdade de Medicina (FMD)
Description: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2019.
metadata.dc.description.ppg: Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular
Agência financiadora: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).
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