Purificação de histonas humanas recombinantes para montagem do dímero de histonas H2A : H2B e ação de extrato lipídico fecal de camundongos, na fisiologia celular

Abstract

A cromatina é formada por unidades repetitivas de nucleossomo, que é composto pelo octâmero de histonas associado ao DNA. Na primeira parte desse trabalho apresento a purificação de histonas recombinantes humanas para montagem do dímeros de histonas H2A:H2B, com o objetivo de realizar estudos estruturais da cromatina. As histonas H2A, H2B, H3 e H4 foram expressas por cepa Rosetta PlysS e purificadas por cromatografia de troca iônica. As histonas purificadas individualmente H2A, H2B, H3 e H4 foram bem expressas. A purificação das histonas H2A, H2B e H3 foram bem-sucedidas, apresentaram um grau de pureza suficiente para a montagem do dímero H2A:H2B por cromatografia de exclusão de tamanho. Contudo, a purificação da histona H4 apresentou diversos contaminantes, impossibilitando a montagem do octâmero. Na segunda parte do trabalho, baseado na hipótese de que lipídeos oriundos da microbiota possam ser usados para regular a função celular, realizei a extração lipídica de material fecal de camundongos. A extração de lipídios de material fecal e ração utilizada na dieta de camundongos foi realizada sob dietas hiperlipídicas ou normolipídicas utilizando o método metanol-clorofórmio. Os extratos foram padronizados por espectrofotometria de absorbância UV. Para se observar o efeito dos extratos sobre a viabilidade de três linhagens celulares humanas, de origem tumoral (HepG2 e HeLa) e não tumoral (MSC). Observamos que o extrato normolipídico fecal possui um maior efeito inibitório na viabilidade celular que o extrato hiperlipídico fecal. Além disto, observamos que o extrato lipídico proveniente da dieta apresenta resultados diferentes quando comparado ao proveniente de material fecal. Estes resultados sugerem que metabolitos lipídicos possuem efeitos na viabilidade celular.